生物考研复试实验操作常见问题解析

常见问题解答

1. 实验操作中如何进行无菌操作？

无菌操作是微生物实验的核心环节，直接关系到实验结果的可靠性。在复试中，你需要掌握以下关键要点：环境准备要严格，实验前需对实验室进行紫外线消毒30分钟，并使用超净工作台维持洁净环境。手部消毒是基础，需用75%酒精擦拭双手并保持干燥至少1分钟。操作时，试管、培养基等器皿需通过火焰灭菌，操作者头部应始终低于皿口以减少杂菌污染。特别要注意，接种环冷却要充分，刚灼烧的接种环不能立即接触培养基，需在无菌区内冷却3-5秒。培养基的灭菌温度和时间需根据成分调整，一般液体培养基为121℃灭菌15-20分钟，固体培养基则需延长至20-30分钟。操作全程要轻柔，避免说话和大幅动作，保持手腕稳定，动作幅度控制在10度以内。

2. 如何正确配置和灭菌缓冲溶液？

缓冲溶液的配置直接影响后续酶活测定等实验的准确性。配置时，首先需明确所需缓冲液pH值和离子强度，常用Hepes、Tris或磷酸盐作为缓冲剂。称量固体缓冲剂时，应使用万分之一分析天平，并快速转移到容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。若需调节pH值，应使用精密pH计监测，并缓慢滴加酸或碱，每次调节后需充分混匀。灭菌方法需根据缓冲液成分选择，含甘氨酸等易分解成分的缓冲液建议采用过滤除菌（0.22μm滤膜），而一般缓冲液可用121℃高压灭菌15分钟。特别注意的是，灭菌后的缓冲液pH值可能发生微小变化，需重新校准。在实验应用中，缓冲液需与样品等体积混合，避免体积变化影响实验结果。配置好的缓冲液应标注日期并冷藏保存，一般可保存1-2周，频繁使用的缓冲液建议现配现用。

3. 动物实验中如何进行灌胃和采血操作？

灌胃和采血是动物实验中常见的操作，技术要点较多。灌胃操作时，需先根据动物体重选择合适型号的灌胃针，成年大鼠一般使用4-6号针。操作前，动物需禁食4-6小时但不禁水，以避免食物影响实验结果。保定时，一手抓住动物背部，另一手将灌胃针沿咽后壁轻轻送入，深度约为体长的1/2-2/3。注入速度要均匀，总量不超过10ml/kg，注完后用生理盐水冲洗针管并缓慢抽出。采血操作则需根据实验目的选择部位，大鼠尾静脉是最常用的采血部位，需先用75%酒精消毒并待其自然干燥。采血量需精确控制，一般不超过总血量的5%。若需多次采血，需间隔至少3天，并选择不同部位。采血后需立即用肝素抗凝或直接置于37℃水浴溶解血液。特别要注意，采血前动物需静置30分钟，避免剧烈运动导致血液凝固异常。所有操作均需佩戴无菌手套，并做好动物安抚工作，减少应激反应。

在复试准备中，建议多查阅教材中的实验操作章节，并结合视频学习具体步骤。实际操作前，可向师兄师姐请教常见问题，并记录自己的疑问。模拟练习时，注意观察老师对细节的处理，比如酒精灯的使用、器械的传递方式等。要培养自己的观察力，注意实验过程中的异常现象及其原因，这将有助于你在复试中展现专业素养。